fa طراحی و ساخت سازه ی E2-fliC با استفاده از ژن fliC باکتری سالمونلا انتریکا و ژن E2 ویروس هپاتیت C و بیان آن در سیستم یوکاریوتی علوم آزمایشگاهی Laboratory Sciences پژوهشی اصيل Original Research <div style="text-align: justify;"><strong>زمینه و هدف:</strong> امروزه یکی از راهکارهای طراحی واکسن، تهیه فیوژن پروتئینهای حاصل از عوامل ایمونوژن عامل عفونی با پروتئین ادجوانت می باشد. مطالعه ی حاضر برای طراحی و ساخت سازه ی E2-fliC به عنوان کاندید واکسن با استفاده از ژن <em>fliC</em>&nbsp;باکتری سالمونلا انتریکا و ژن E2 ویروس هپاتیت C و بیان آن در سیستم یوکاریوتی اجرا گردید.<br> <strong>روش بررسی:</strong> در این مطالعه که به صورت یک تحقیق بنیادی-کاربردی است، برای ساخت سازه ی E2-fliC، دو قطعه ی E2 و <em>fliC</em> از پلاسمیدهای pBluescript-E2 و pBluescript-fliC به روش PCR تکثیر شدند. برای تهیه پلاسمید نوترکیب pcDNA-E2-fliC، ابتدا پلاسمید (+)pcDNA3.1 از سلولهای DH5&alpha; استخراج و قطعه ی E2 در آن الحاق گردید. با تهیه پلاسمید نوترکیب pcDNA3.1-E2، در مرحله بعد الحاق قطعه ی <em>fliC</em> در آن انجام شد. برای ارزیابی بیان سازه ی E2-fliC، سازه در پلاسمید pEGFP-N3 الحاق گردید و ترانسفکشن پلاسمید نوترکیب pEGFPN3-E2-fliC به سلولهای COS-7 انجام شد تا بیان پروتئین در زیر میکروسکوپ فلورسنت با مشاهده ی نور سبز ارزیابی شود.<br> <strong>یافته ها: </strong>ظهور نور فلورسان سبز در سلولهای مورد مطالعه توسط میکروسکوپ فلورسنت، بیشترین بیان از ساختار E2-fliC را 48 ساعت پس از ترانسفکشن نشان داد. به علاوه تهیه پلاسمید نوترکیب pcDNA-E2-fliC با روش PCR، برش آنزیمی و&nbsp;توالی یابی تایید شد.<br> <strong>نتیجه گیری:</strong> یافته های ما پیشنهاد می کنند که فیوژن پروتئین E2-FliC به طور موثری بیان شده و ممکن است از لحاظ&nbsp;آنتی ژنیسیته بتواند همانند پروتئین E2 ویروس آلوده کننده، پس از ایمیونیزاسیون موش ها با pcDNA-E2-fliC به عنوان کاندید واکسن در تحریک سیستم ایمنی عمل کند.</div> <div style="text-align: justify;"><strong>Background and Aim:</strong> At the present time one of the strategies in vaccine design is generation of fusion proteins containing (including) immunogen of infectious agents and adjuvants. In this study design and construction of E2-fliC fragment as a vaccine candid was conducted by using <em>fliC</em> gene from Salmonella enterica and E2 gene from hepatitis C virus<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Materials and Methods:</strong> To prepare the E2-fliC construct, E2 and <em>fliC</em> fragments were first amplified from pBluscript-E2 and pBluscript-fliC, respectively by PCR method. To generate pcDNA-E2-fliC plasmid, E2 was subcloned into plasmid pcDNA3.1 (+) which was extracted from DH5&alpha; cells. The <em>fliC</em> sequence was then cloned into the pcDNA3.1-E2. To evaluate the expression of E2-fliC construct, it was inserted into the pEGFP-N3 expression vector. Then COS-7 cells were transfected with pEGFPN3- E2-fliC to evaluate the expression of the fusion protein by observation of the EGFP signal under the fluorescence microscope<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Results:</strong> By development of GFP fluorescent using fluorescence microscopy the most expression of E2-fliC construct was observed at 24h after transfection. The accuracy of the recombinant plasmid pcDNA-E2-fliC was confirmed by PCR, restriction enzymes and DNA sequencing<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Conclusion:</strong> Our findings suggest that E2-FliC fusion protein has expressed efficiently and most likely similar to HCV E2 protein induces immune system of mice after their immunization with pcDNA-E2-fliC<span dir="RTL">.</span></div> ژن fliC, سالمونلا انتریکا, ژن E2, ویروس هپاتیت C , بیان سازه‌ی E2-fliC, فیوژن پروتئین fliC Gene, Salmonella enterica, E2 Gene, Hepatitis C Virus, Expression of E2-FliC, Fusion Protein 1 10 http://payavard.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-301&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Mehdi Soltan Dallal محمد مهدی سلطان دلال No Professor, Pathobiology Department, Microbiology Division, School of Public Health, Food Microbiology Research Center, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran استاد گروه پاتوبیولوژی، بخش میکروب شناسی، دانشکده بهداشت، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی مواد غذایی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران Abolfazl Keshavarz ابوالفضل کشاورز No Master of Sciences Student in Food Microbiology, Pathobiology Department, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد میکروب شناسی مواد غذایی، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران Ebrahim Kord ابراهیم کرد No Ph.D. Candidate in virology, Medical Virology Department, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشجوی دکتری ویروس شناسی پزشکی، گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Nastaran Ansari نسترن انصاری No Ph.D. Candidate in virology, Medical Virology Department, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشجوی دکتری ویروس شناسی پزشکی، گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Zamaneh Hajikhezri زمانه حاجی خضری No Ph.D. Candidate in virology, Medical Virology Department, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشجوی دکتری ویروس شناسی پزشکی، گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Katayoun Samimi-Rad کتایون صمیمی راد ksamimirad@tums.ac.ir Yes Associate Professor, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشیار گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران