fa طراحی و ساخت DNA Ladder صد جفت بازی با روش تلفیقی PCR و هضم آنزیمی <strong>زمینه و هدف:</strong> مارکرهای DNA به‌عنوان یکی از ابزارهای بسیار ضروری در آزمایشگاه‌های بیولوژی مولکولی مطرح می‌باشند. از آن‌ها برای تخمین اندازه قطعات DNA مورد آزمایش، به‌واسطه مقایسه میزان حرکت الکتروفورتیک قطعه مجهول و مارکر پس از انجام الکتروفورز استفاده می‌گردد. امروزه روش‌های متنوعی برای تولید تجاری این مارکرها به‌کار گرفته می‌شوند. در این مطالعه روشی کارآمد برای تولید تجاری این محصول ارایه گردیده است. <strong><br>روش‌ بررسی:</strong> در این پژوهش برای دست‌یابی به قطعات با اندازه مورد نظر از تلفیق دو روش هضم آنزیمی و واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز بهره گرفته شد. در روند مبتنی بر هضم آنزیمی به طراحی و ساخت پلاسمیدهایی پرداخته شد که اندازه DNA تشکیل دهنده بدنه آن‌ها برابر با طول قطعه مورد نظر بوده و با خطی کردن پلاسمید، قطعه مربوطه تولید گردید و در روش PCR در Multiple Cloning Site MCS پلاسمید pTZ57R قطعاتی با طول‌های مورد نظر قرار داده شد و از آن‌ها به‌عنوان الگو برای تولید نهایی این قطعات در واکنش PCR استفاده گردید. <strong><br>یافته‌ها: </strong>با استفاده از این استراتژی قطعات 2000 و 3000 جفت بازی به‌واسطه هضم آنزیمی پلاسمیدهایی با همین اندازه تولید شد و قطعات 100 تا 1500 جفت بازی، طی واکنش PCR و تنها با استفاده از یک جفت پرایمر جلوبر و معکوس مکمل بدنه پلاسمید در دو طرف Multiple cloning site پلاسمید pTZ57R حاصل گردید. <strong><br>نتیجه‌گیری:</strong> مزیت این روش استفاده از یک جفت پرایمر برای تولید تمام قطعات با روش PCR و استفاده از آنزیم‌های ارزان قیمت در تهیه قطعات بزرگ می‌باشد.<p></p> Background: Molecular DNA markers are one of the most important tools in molecular biology labs. The size of DNA molecules is determined by comparing them with known bands of markers during gel electrophoresis. There are many different protocols to produce these kinds of molecular markers. In this study we have suggested an efficient strategy to produce molecular weight markers in industrial proportions. Methods: To achieve the desired sizes of DNA fragments, a combination of two previously known methods, restriction enzyme digestion and polymerase chain reaction (PCR), were used. The enzymatic digestion process was based on designing and constructing plasmids which equaled in size with the desired length of DNA fragments and produced the desired DNA fragment upon linearization. In the PCR method, the desired length of DNA fragments were cloned in multiple cloning sites of pTZ57R plasmid and in a PCR reaction, the new constructed plasmid was used as a template to produce the final fragment. Results: Upon application of this strategy, 2000 and 3000 bp DNA fragments were produced by enzymatic digestion of plasmids of the same size. Moreover, 100 to 1500 bp fragments were produced during PCR using only a set of forward and reverse primers at the flanking region of pTZ57R multiple cloning site. Conclusion: The highest advantage of this cost-benefit approach is to produce different types of molecular weight markers by using an effective and short protocol T/A کلونینگ,مارکر مولکولی DNA,الکتروفورز ژل آگارز,نشانگر وزن مولکولی DNA markers,DNA Ladder,agarose gel electrophoresis,molecular weight 75 82 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-260&slc_lang=fa&sid=1 Saidijam M مسعود سعیدی جم No گروه بیوتکنولوژی دانشگاه علوم پزشکی همدان Khanahmad Shahreza H حسین خان احمد شهرضا hossein_khanahmad@yahoo.com Yes انستیتو پاستور ایران تهران Rikhtegaran Tehrani Z زهرا ریخته‌گران تهرانی No بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان Karimizare S سکینه کریمی زارع No ژنتیک مولکولی، انستیتو پاستور تهران Shabab N نوشین شباب No گروه بیوتکنولوژی دانشگاه علوم پزشکی همدان Behdani M مهدی بهدانی No بیوتکنولوژی پزشکی انستیتو پاستور ایران بخش ژنتیک پرشکی