مقدمه: نقش سايتوکاين ها بعنوان مولکولهای رابط بين سلولی و تنظيم کننده عملکرد ايمنی بدن از مدتها پيش شناخته شده و IL-2 که يکی از مهمترين سايتوکاين های بدن در تنظيم پاسخ های ايمنی می باشد، بسيار مورد توجه محققان ايمونولوژی در زمينه های آزمايشگاهی و کلينيکی قرار دارد.

مواد و روش ها: در تحقيق حاضر که هدف آن، توليد و جداسازی IL-2 می باشد، از يک رده سلولی انسانی T بنام Jurkat که منبع خوبی برای توليد IL-2 در مقايسه با ساير منابع بوده و مقادير متنابهی از IL-2 را توليد می نمايد، استفاده شده است. از آنجا که زمان مناسب تحريک سلول، غلظت مناسب ميتوژن و مدت زمان تحريک سلول ها در توليد بهينه IL-2 اهميت دارد، لذا اين سه پارامتر بطور جداگانه مورد ارزيابی قرار گرفتند. پس از آن محيط رويی حاصل از تحريک سلول ها بمنظور دستيابی به مقادير کافی از IL-2 و حذف مواد مداخله گر با استفاده از دستگاه، آميکون تغليظ شده و ميزان کل پروتئين آن سنجيده شد و در نهايت جهت اندازه گيری ميزان IL-2 توليد شده از روش الايزا و بمنظور تعيين وزن مولکولی IL-2 بدست آمده از الکتروفورز SDS-PAGE استفاده گرديد. ستون آناليتيکال HPLC با روش Reverse phase نيز جهت تاييد و تطابق اين مولکول با IL-2 استاندارد بکار گرفته شد. بمنظور بررسی فعاليت بيولوژيک IL-2 نيز از روش سنجش بيولوژيک با استفاده از لنفوبلاست های انسانی استفاده گرديد.

يافته ها: نتايج حاصل از ميانگين شمارش سلول ها در نمودار (1) نشان می دهد که رشد لگاريتمی سلول ها از روز دوم آغاز شده و با غلظت اوليه 5^10 cell/ml در روز سوم به غلظت مطلوب برای تحريک يعنی 6^10 می رسند. مطابق نمودار پيک منحنی رشد سلول ها در روز پنجم می باشد. ميزان IL-2 توليد شده تحت تاثير ConA با غلظت 20µg/ml و PMA با غلظت 10ng/ml و مدت زمان تحريک 22-20 ساعت بيش از ساير موارد می باشد و در صورت لزوم می توان بجای ConA از PHA با غلظت 1µg/ml نيز استفاده کرد.

نتيجه گيری و توصيه ها: اين مطالعه بدليل استفاده از ساده ترين و کم هزينه ترين روش جداسازی و عدم دسترسی به مقادير زيادی از آنتی بادی مونوکلونال جهت کروماتوگرافی Affinity مقدار IL-2 بدست آمده کمتر از مقادير فوق الذکر می باشد اما بمنظور انجام مراحل تزريق به موش و تهيه آنتی بادی مونوکلونال عليه IL-2 که از اهداف بعدی اين مطالعه می باشد کاربرد دارد. از آنجا که دستيابی به مولکول خالص IL-2 در تهيه کيت های تشخيصی از اهميت بسزايی برخوردار است، لذا تهيه مقادير زيادی از محيط کشت رويی سلول های تحريک شده و استفاده از روش های يک مرحله ای تخليص پس از تغليظ محلول خام توصيه می شود.