|
|
1390/2/11، جلد ۶۹، شماره ۲، صفحات ۷۵-۸۲
|
|
|
| عنوان فارسی |
طراحی و ساخت DNA Ladder صد جفت بازی با روش تلفيقی PCR و هضم آنزيمی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
زمينه و هدف: مارکرهای DNA بهعنوان يکی از ابزارهای بسيار ضروری در آزمايشگاههای بيولوژی مولکولی مطرح میباشند. از آنها برای تخمين اندازه قطعات DNA مورد آزمايش، بهواسطه مقايسه ميزان حرکت الکتروفورتيک قطعه مجهول و مارکر پس از انجام الکتروفورز استفاده میگردد. امروزه روشهای متنوعی برای توليد تجاری اين مارکرها بهکار گرفته میشوند. در اين مطالعه روشی کارآمد برای توليد تجاری اين محصول ارايه گرديده است.
روش بررسی: در اين پژوهش برای دستيابی به قطعات با اندازه مورد نظر از تلفيق دو روش هضم آنزيمی و واکنش زنجيرهای پلیمراز بهره گرفته شد. در روند مبتنی بر هضم آنزيمی به طراحی و ساخت پلاسميدهايی پرداخته شد که اندازه DNA تشکيل دهنده بدنه آنها برابر با طول قطعه مورد نظر بوده و با خطی کردن پلاسميد، قطعه مربوطه توليد گرديد و در روش PCR در Multiple Cloning Site MCS پلاسميد pTZ57R قطعاتی با طولهای مورد نظر قرار داده شد و از آنها بهعنوان الگو برای توليد نهايی اين قطعات در واکنش PCR استفاده گرديد.
يافتهها: با استفاده از اين استراتژی قطعات 2000 و 3000 جفت بازی بهواسطه هضم آنزيمی پلاسميدهايی با همين اندازه توليد شد و قطعات 100 تا 1500 جفت بازی، طی واکنش PCR و تنها با استفاده از يک جفت پرايمر جلوبر و معکوس مکمل بدنه پلاسميد در دو طرف Multiple cloning site پلاسميد pTZ57R حاصل گرديد.
نتيجهگيری: مزيت اين روش استفاده از يک جفت پرايمر برای توليد تمام قطعات با روش PCR و استفاده از آنزيمهای ارزان قيمت در تهيه قطعات بزرگ میباشد. |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
T/A کلونينگ,مارکر مولکولی DNA,الکتروفورز ژل آگارز,نشانگر وزن مولکولی |
|
| عنوان انگلیسی |
Designing and constructing an 100 bp DNA Ladder by combining PCR and enzyme digestion methods |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Molecular DNA markers are one of the most important tools in molecular biology labs. The size of DNA molecules is determined by comparing them with known bands of markers during gel electrophoresis. There are many different protocols to produce these kinds of molecular markers. In this study we have suggested an efficient strategy to produce molecular weight markers in industrial proportions. Methods: To achieve the desired sizes of DNA fragments, a combination of two previously known methods, restriction enzyme digestion and polymerase chain reaction (PCR), were used. The enzymatic digestion process was based on designing and constructing plasmids which equaled in size with the desired length of DNA fragments and produced the desired DNA fragment upon linearization. In the PCR method, the desired length of DNA fragments were cloned in multiple cloning sites of pTZ57R plasmid and in a PCR reaction, the new constructed plasmid was used as a template to produce the final fragment. Results: Upon application of this strategy, 2000 and 3000 bp DNA fragments were produced by enzymatic digestion of plasmids of the same size. Moreover, 100 to 1500 bp fragments were produced during PCR using only a set of forward and reverse primers at the flanking region of pTZ57R multiple cloning site. Conclusion: The highest advantage of this cost-benefit approach is to produce different types of molecular weight markers by using an effective and short protocol |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
DNA markers,DNA Ladder,agarose gel electrophoresis,molecular weight |
|
| نویسندگان مقاله |
22558---22559---22560---22561---22562---22563--- |
|
| نشانی اینترنتی |
http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-260&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
General |
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|
