|
|
1386/12/11، جلد ۶۵، شماره ۱، صفحات ۱۳-۱۸
|
|
|
| عنوان فارسی |
بررسی توليد و تخليص استرپتوکيناز نوترکيب با استفاده از وکتور بيانی pMAL |
|
| چکیده فارسی مقاله |
استرپتوکيناز (SK) يک داروی ويژه و موثر در درمان ترومبوليتيک سکتههای حاد قلبی میباشد. علیرغم وجود محدوديتهای قابل توجه، بهدليل قيمت نسبتا˝ پايين استرپتوکيناز اين پروتئين هنوز يک داروی انتخابی بهويژه در کشورهای کمدرآمد میباشد. در بررسی حاضر، توليد و تخليص استرپتوکيناز با استفاده از وکتور بيانی pMAL مورد ارزيابی قرار گرفته است.
روش بررسی: ابتدا پلاسميد pMAL که حاوی ژن skc (بدستآمده از Streptococcus equisimilis H46A) بود، به ميزبان مناسب (E.coli BL21) انتقال يافت. در مرحله بعد شرايط توليد استرپتوکيناز از نظر دما، غلظتهای مختلف IPTG بهعنوان القاﺀگر و نيز مدت زمان القاﺀ بهينهسازی شد. اين پروتئين با استفاده از ستون کروماتوگرافی DEAE-Sepharose خالصسازی شده و در نهايت خلوص و فعاليت آن تعيين گرديد.
يافتهها: پس از بهينهسازی شرايط توليد، قسمت عمده پروتئين تام باکتری متعلق به SK-MBP (اسرپتوکيناز-پروتئين متصلشونده به مالتوز) گرديد. SK-MBP خالصشده بر روی ژل SDS-PAGE يک باند تک را نشان داد. فعاليت بيولوژيکی SK-MBP خالصشده در حضور پلاسمينوژن با استفاده از سوبسترای سنتتيک (S2251) اندازهگيری شد که نشاندهنده فعاليت بالای آن بود.
نتيجهگيری: در اين مطالعه از وکتور بيانی pMAL که پروتئين فيوژن محلول (SK-MBP) را در E.coli BL21 توليد میکند استفاده کردهايم. با استفاده از اين روش، علیرغم بيان بالای SK-MBP، از تشکيل Inclusion body جلوگيری شد. انتخاب ميزبان مناسب برای توليد پروتئينهای نوترکيب يکی از مهمترين فاکتورهايی است که بر روی سطح بيان پروتئين مورد نظر تاثير میگذارد. پيشنهاد میشود از ميزبانهای ديگر نيز برای اين منظور استفاده شود. |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
سترپتوكيناز، ترومبوليتيك pMAL |
|
| عنوان انگلیسی |
Production and purification of recombinant streptokinase using pMAL expression vector |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: Streptokinase (SK) is an effective and specific thrombolytic treatment of acute myocardial infarction. Despite its significant limitations, streptokinase remains the drug of choice particularly in countries with poorer economies because of its relatively low cost. In this study, the production and purification of streptokinase using a pMAL expression vector were evaluated.
Methods: The pMAL vector, including the skc gene, obtained from Streptococcus equisimilis H46A, was transformed into E. coli BL21 to produce the soluble active fusion protein SK-MBP. The conditions of SK production were optimized by manipulating temperature, induction time and IPTG concentrations. This protein was purified by DEAE-sepharose column chromatography and the final purity was determined and activity of purified SK-MBP was measured using a synthetic substrate (S2251).
Results: After optimizing the production conditions, SK-MBP was the major portion of total protein. Purified SK-MBP formed a single band using SDS-PAGE and had high biological activity.
Conclusion: In this study we used pMAL expression vector to produce SK-MBP in E. coli BL21. Using this method we prevented the accumulation of inclusion bodies in spite of the high level of production of SK-MBP. Choosing a suitable host organism for the production of recombinant proteins is one of the most important factors that influence the level of desired protein production. Further studies are recommended to test other host organisms for this purpose. |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
Streptokinase, Thrombolytic, pMAL |
|
| نویسندگان مقاله |
24688---24689--- |
|
| نشانی اینترنتی |
http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-840&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
General |
| نوع مقاله منتشر شده |
|
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|
