مهدی حمایتکار، نوشین داوودی، فاطمه دوامی، کیوان مجید زاده اردبیلی، فرزانه برخورداری، فریدون مهبودی،
دوره 68، شماره 11 - ( 11-1389 )
زمینه
و هدف: پروتیین فعال‌کننده
پلاسمینوژن بافتی نوترکیب (rt-PA) یکی
از مهم‌ترین ترکیبات ضد لخته می‌باشد که در درمان سکته‌های قلبی و مغزی از اهمیت
بالایی برخوردار است. تاکنون روش‌های مختلفی برای
تولید پروتیین‌های نوترکیب هترولوگ با استفاده از میزبان‌های پروکاریوتیک و
یوکاریوتیک مورد بررسی قرار گرفته است.
اخیراً انگل لیشمانیا تارنتولا Leishmania tarentolae (L. tarentolae) به دلایل متعددی از جمله عدم بیماری‌زایی و
شرایط ویژه آن در تولید پروتیین‌های پیچیده اهمیت زیادی یافته است.
روش
بررسی: در تحقیق حاضر به‌منظور
بهینه‌سازی میزان بیان t-PA نوترکیب
انسانی با استفاده از سلول L. tarentolae دو سازه
بیانی که هر یک حاوی دو کپی از cDNA t-PA بود
طراحی و ساخته شد. این سازه‌ها از طریق الکتروپوریشن به سلول‌های L .tarentolae وارد و در ژنوم انگل ادغام گردیدند. پس از
انتخاب کلون‌های ترانسفورم شده، بیان t-PA ترشح شده به
محیط کشت سلولی و میزان فعالیت بیولوژیکی آن توسط آزمون‌های وسترن بلات و کرومولیز
(Chromolize) بررسی گردید.
یافته‌ها: ظهور
باند kD64 در غشاء نیتروسلولز حضور t-PA در محیط کشت
سلول‌های L.
tarentolae ترانسفکت شده
را تایید کرد. نتایج آزمون علاوه بر تایید حضور پروتیین t-PA فعال در
سوپ سلولی نشان داد که میزان فعالیت پروتیین ترشح شده در سلول‌های ترانسفکت شده با
یک سازه، IU/ml375 و در
سلول‌های ترانسفکت شده با هر دو سازه برابر با IU/ml480 می‌باشد.
نتیجه‌گیری: در این مطالعه میزان فعالیت t-PA بیان
شده در محیط کشت سلول‌های ترانسفکت شده، دست‌کم هفت برابر بیشتر از مقدار گزارش
شده در مطالعات پیشین در این میزبان و نیز بیشتر از عدد گزارش شده در بسیاری از
میزبان‌های یوکاریوتیک دیگر می‌باشد.
